Az ELISA teszt számos betegséget észlel, ezért széles körű alkalmazást talált az orvostudományban és így tovább. Az ELISA teszt azonban leginkább a Lyme-kór diagnózisáról ismert. Mi az ELISA teszt? Hogyan értelmezzük az eredményeket? Mi a teszt ára?
Tartalomjegyzék:
- ELISA teszt - mit észlel? ELISA teszt alkalmazása
- ELISA teszt - mi a teszt?
- ELISA teszt és Lyme-kór - mikor kell elvégezni?
- ELISA teszt - ár. Mennyibe kerül az ELISA teszt?
- ELISA teszt - eredmények. Lehetnek hamis pozitív eredmények?
- ELISA teszt - eredmények. Lehetnek hamis negatívak?
Az ELISA teszt, vagyis az enzimhez kapcsolt immunszorbens teszt egy általánosan használt laboratóriumi módszer, amely többek között az antitestek mennyiségi kimutatására a vérben.
Emiatt az ELISA teszt alkalmazást talált a bakteriális betegségek, például a Lyme borreliosis diagnosztizálásában.
Az ELISA módszer előnye az egyszerűsége és a gyors megvalósítás lehetősége, valamint a nagy érzékenység. Az ELISA-eljárást speciális műanyag lemezek alkalmazásával végezzük, pl. Borrelia fehérjékkel (antigének) és specifikus monoklonális antitestekkel töltött üregekkel, amelyeket az antitestek kimutatására terveztek a beteg mintájában.
ELISA teszt - mit észlel? ELISA teszt alkalmazása
Az ELISA módszer nagy érzékenysége és egyszerűsége számos betegség diagnosztizálásához tette alkalmassá, de leginkább Lyme-kór diagnosztikai módszereként ismert.
A Lyme borreliosis diagnózisa esetén az ún közvetett ELISA, amely lehetővé teszi a specifikus IgM vagy IgG kimutatását a vizsgált anyagban. Ugyanígy az antitestek is kimutathatók a diagnózis érdekében:
- vírusfertőzések: herpeszvírusok (herpesz, herpes zoster, Epstein-Barr, citomegalovírus), HIV, hepatitis vírusok (HBV és HCV)
- protozoon fertőzések: toxoplazmózis, giardiasis
- autoimmun betegségek: cöliákia (anti-tTG vagy anti-DPG antitestek), Hashimoto-kór (anti-TG és anti-TPO antitestek), gyulladásos bélbetegségek (anti-ASCA és anti-ANCA antitestek)
- parazita betegségek és allergiák, amelyekben specifikus IgE antitesteket detektálnak. Megnövekedett szintjük jelezheti az allergia jelenlétét, például a virágporra és az ételre, vagy a parazita inváziót (fegyveres galandféreg, emberi orsóféreg)
Az ELISA módszer (az úgynevezett szendvics ELISA) módosításai is vannak, amelyek lehetővé teszik az antitestektől eltérő fehérjeminta kimutatását. Ezután a vizsgálat célja az, hogy kimutassa a biológiai anyagban:
- vírusok vagy baktériumok töredékei, leggyakrabban egy adott kórokozóra jellemző antigének
- szérum hormonok, például ösztrogén, prolaktin, TSH, fT4, kortizol
- enzimek, például kalprotektin, hasnyálmirigy-elasztáz, alkalikus foszfatáz
- tumor markerek, például CA-125
- gyógyszerek jelenléte a szérumban
Ez a módszer az élelmiszeriparban is alkalmazható, ahol kimutathatja az allergének (pl. Tej, földimogyoró), GMO-k vagy toxinok nyomait az élelmiszerekben.
ELISA teszt - miről van szó?
Például a Lyme borreliosis diagnózisa az ELISA módszer segítségével az immunfehérjék biológiai anyagban történő kimutatásában áll - antitestek, amelyek a Borrelia antigének elleni válasz során keletkeznek.
Az antitesteket két osztályban teszteljük: IgM és IgG. Az IgM-ek az első antitestek, amelyek baktériumokkal érintkezve jelennek meg a szervezetben, és idővel csökkennek.
Helyüket tartósabb IgG antitestek foglalják el, amelyek több tucat évig is megmaradhatnak a testben.
Ily módon a baktériumok jelenlétét a testben közvetetten tesztelik a Borrelia spirochetes ellen specifikus ellenanyagok kimutatásával.
A fertőzés különböző szakaszaiban lévő antitestek a Borrelia különféle fehérjék ellen irányulhatnak. Például korai stádiumban a p41 fehérje.
A későbbi szakaszokban egyre több fehérje kezd megjelenni, például p21, p30, p39, p43. Ez az oka annak, hogy a Lyme-kór diagnosztizálása rendkívül nehéz.
A baktériumfehérjék kiválasztása rendkívül fontos, hogy a teszt magas diagnosztikai értékkel bírjon. Ezért a Lyme-kór diagnosztizálásában rutinszerűen II. Vagy III. Generációs ELISA teszteket kell alkalmazni, amelyek során a legmegbízhatóbb eredmény elérése érdekében kiválasztják a fehérjeszetteket.
ELISA-teszt és Lyme-kór. Mikor kell csinálni?
A Lyme borreliosis egy bakteriális betegség, amelyet a Borrelia burgdorferi baktériumok és sokféle fajtája okoz.
A betegség diagnózisa nem egyszerű a Borrelia elleni immunválasz összetettsége és a laboratóriumi módszerek hiányosságai miatt.
A leggyakrabban alkalmazott laboratóriumi módszer a rendkívül érzékeny ELISA módszer, amely kimutatja a bakteriális fehérjék ellen termelt specifikus antitesteket.
A Lyme-kór diagnosztizálásakor a közvetett ELISA-módszert alkalmazzák, amelyben a következő szakaszokat különböztetik meg:
- a lemezen lévő üregek inkubálása a betegtől összegyűjtött anyaggal, például szérummal. Ha a tesztelt anyagban vannak Borrelia elleni antitestek, azok a reakció alján lévő fehérjékhez kötődnek
- majd a felesleges szérumot kimosják egy speciális mosófolyadékkal (puffer) és az ún konjugátum, azaz olyan antitest, amely egy enzimhez kapcsolódik, és amely kötődik a reakciókamrákban korábban összekapcsolt antitestekhez
- majd hozzáadjuk a konjugátum szubsztrátumát, és színreakció lép fel (pozitív eredmény), vagy nincs színreakció (negatív eredmény)
- az utolsó lépés a Borrelia elleni antitestek koncentrációjának leolvasása az olvasó által (spektrofotométer) a beteg szérumában
A Lyme-kór ELISA-tesztjét vérből, neurológiai tünetek (neuroborreliosis) esetén a cerebrospinalis folyadékból is elvégzik.
Az ízületi folyadékot nem szabad tesztelni, mivel nagy a valószínűsége a hamis pozitív eredményeknek.
A betegség diagnosztizálásának alapját a klinikai tünetek jelzik, amelyeket a laboratóriumi vizsgálatok eredményei megerősítenek.
Tünetek nélküli laboratóriumi vizsgálati eredmény hozzáadása nem engedélyezi a Lyme-kór diagnosztizálását, mivel bebizonyosodott, hogy a Borrelia elleni antitesteket egészséges embereknél is kimutatják.
A Lyme borreliosis szerológiai diagnózisa félkvantitatív szűrővizsgálattal kezdődik. Ha az eredmény negatív, az azt jelenti, hogy nem észleltek Borrelia spirochétákat, vagy az eredmény hamis negatív.
Ha az eredmény pozitív vagy gyengén pozitív (egyértelmű), akkor megerősítő Western blot tesztet kell végezni, amelyet nagy specificitás jellemez.
Ez megerősíti az ELISA módszerrel kapott eredmények "valóságtartalmát". A diagnosztika során nem hagyhatja ki a fenti lépések egyikét sem, például nem végezhet azonnal diagnosztikát a Western blot módszerrel, vagy csak a pozitív ELISA-eredmény alapján végez diagnózist.
Lengyelországban a Lyme borreliosis diagnózisa nagyon gyakran az első szűrési szakaszban ér véget, ami a pozitív vagy gyengén pozitív eredmények téves értelmezését eredményezi.
Ajánlott cikk:
Limfocita transzformációs teszt (LTT) Jó tudniELISA teszt - ár. Mennyibe kerül az ELISA teszt?
A teszt ára körülbelül 60 PLN, és azonnal elvégzik. Körülbelül három hónapot várhat a beutalás eredményére.
ELISA teszt - eredmények. Lehetnek hamis pozitív eredmények?
Hamis pozitív eredmények származnak az IgM antitestek más fehérjékkel való keresztreakciójából. A test által termelt antitestek „helytelenül” felismerhetik a más mikroorganizmusokból származó antigént Borrelia antigénként.
A leggyakoribb "hibák" treponema pallidummal, herpeszvírusokkal fertőzötteknél, valamint szisztémás lupus erythematosusban és más reumatikus betegségekben szenvedőknél fordulnak elő.
ELISA teszt - eredmények. Lehetnek hamis negatívak?
A fertőzés korai szakaszában hamis negatív eredmények jelenhetnek meg, majd a vizsgálatot körülbelül 3-4 hét után meg kell ismételni. Ezt nevezik szerológiai ablak, ez a fertőzés kezdeti szakasza, amelyben a testnek még nem sikerült "termelnie" specifikus antitesteket.
Ugyanez vonatkozik az immunhiányos emberekre, akik nem termelnek elegendő antitestet.
Nagy probléma, különösen nagyon intenzív fertőzések esetén, az ún immun komplexek, amelyek Borrelia antigénekből és specifikus antitestekből állnak.
Ennek eredményeként az antitestek "láthatatlanná" válnak az olyan általánosan használt módszereknél, mint az ELISA, és bár vannak jelen a vizsgált anyagban, nem mutathatók ki.
Ilyen esetekben a laboratórium alkalmazhatja az immunkomplexek lebontását. Ezt a kezelést az antitestek felszabadítására tervezték. Ezt a módszert azonban nem használják széles körben, mivel a laboratóriumokban nincs szabványosítás.
Megéri tudniMiért nem könnyű diagnosztizálni a Lyme-kórt?
Ennek oka a Borrelia elleni immunválasz összetettsége és a laboratóriumi módszerek korlátai. A fajták sokfélesége és a fertőzéseket okozó újak megjelenése, különösen az európai kontinensen, nem segíti elő a hatékony diagnosztikai módszerek kifejlesztését.
Újabban újabb fajták jelentek meg Európában, mint például a Borrelia bissetii, a Borrelia valaisiana és a Borrelia spielmanii. Ezenkívül a szervezetben a Borrelia spirochetesek cisztákká válhatnak, vagy a test olyan helyeiben maradhatnak, amelyek az immunrendszer sejtjeihez nem hozzáférhetők.
Így "láthatatlan" az immunrendszer számára. Ezenkívül bebizonyosodott, hogy a szövetek tartalmazhatnak olyan baktériumtöredékeket, amelyek erősen gyulladásgátló tulajdonságokkal bírnak. Úgy gondolják, hogy a negatív laboratóriumi vizsgálati eredmények ellenére felelősek a Lyme-kór krónikus tüneteiért.
Irodalom
1. Witecka-Knysz E. és mtsai. Lyme-kór: miért olyan nehéz a diagnózis? Laboratóriumi diagnosztikus 2007. április.
2. Moore A. és mtsai. A Lyme-kór laboratóriumi diagnózisának jelenlegi irányelvei, közös klinikai buktatók és jövőbeni iránymutatások, Egyesült Államok. Emerg Infect Dis. 2016. július; 22. (7).
3. A kullancs által terjesztett betegségek laboratóriumi diagnosztikája. A munkacsoport ajánlásai: Országos Laboratóriumi Diagnosztikusok Kamara, Országos Közegészségügyi Intézet-Országos Higiéniai Intézet, Nemzeti tanácsadó a fertőző betegségek területén, Fertőző betegségek és neuroinfekciók osztálya, Białystoki Orvostudományi Egyetem, Lengyel Virológiai Társaság, Varsó 2014
4. Hosseini S. és mtsai: Enzimhez kapcsolt immunszorbens assay (ELISA) A-tól Z-ig Springer 2017.
